Het scoren van ALK breuken m.b.v. FISH en immunohistochemie (versie 01-06-2015)
ysis LSI ALK Break Apart Rearrangement Probe Kit (Abbott 06N38-020) voor de detectie van ALK-breuken (CE-marked)
FISH wordt uitgevoerd op een gebied dat door de patholoog is aangegeven op de HE-coupe met minimaal 100 neoplastische kernen. Bij <100 neoplastische kernen wordt het weefsel ongeschikt geacht en wordt de FISH-analyse niet uitgevoerd. De FISH wordt door 2 beoordelaars gescoord op minimaal 50 neoplastische kernen met een evalueerbaar FISH-signaal in het gebied aangegeven door de patholoog. Voor het scoren van de FISH patronen worden de volgende criteria (Thunnissen et al. Virchows Arch 461:245-257, 2012) gebruikt:
- Cellen worden beschouwd als ALK-FISH positief indien:
- ten minste 1 set van rode en groene signalen >=2x de diameter van het grootste van de 2 signalen uit elkaar gelegen ligt; of
- wanneer een los/extra 5'-probe (rood) signaal zichtbaar is zonder een corresponderend 3'-probe (groen) signaal naast het normale colocaliserende (gele) signaal. Opmerking: een los/extra 3'-probe (groen) signaal zonder een corresponderend 5'-probe (rood) signaal wordt als negatief (= geen ALK-breuk) afgegeven.
- Tumorweefsel wordt beschouwd als negatief (= geen ALK-breuk) als in <10% van de kernen een breukpatroon wordt gevonden;
- Tumorweefsel wordt beschouwd als positief (= ALK-breuk aanwezig) als in >50% van de kernen een breukpatroon wordt gevonden;
- Tumorweefsel wordt beschouwd als equivocaal bij een percentage breuk positieve kernen tussen 10% en 50%; in dit geval beschouwen we een gemiddelde score van >=15% als positief (= ALK-breuk aanwezig) en <15% als negatief (= geen ALK-breuk);
- Als er <50 kernen met evalueerbare FISH signalen aanwezig zijn, is de uitslag niet-informatief.
- Op basis van deze Abbott-ALK FISH assay kunnen we niet uitsluiten dat er andere genomische ALK-veranderingen aanwezig zijn
Detectie van ALK- expressie mbv VENTANA anti-ALK (D5F3) Rabbit Monoclonal Primary Antibody.
Voor de detectie van ALK-expressie gebruiken we een gestandaardiseerde, volledig automatische immunohistochemische assay op de Ventana BenchMark Ultra: het VENTANA anti-ALK (D5F3) Rabbit Monoclonal Primary Antibody (Ventana Cat. No. 790-4794 / 06679072001 / CE-IVD-marked) in combinatie met de OptiView DAB IHC Detection Kit en de OptiView Amplification Kit. Voor de beoordeling van de immunohistochemische kleuring van ALK met dit protocol wordt gebruik gemaakt van de "Ventana ALK scoring interpretation guide". Zie voorbeeld in Wynes et al. JTO 2014;9:631.
Klinische interpretatie m.b.t. de detectie van ALK-breuken met FISH en IHC
Longcarcinomen (met name NSCLC) met een ALK-breuk en/of sterke ALK-expressie hebben in het algemeen een goede respons bij behandeling met verschillende ALK-remmers. Indien u een behandeladvies wenst, kunt u contact opnemen met de Moleculaire Tumor Board via [email protected].